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BAC
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貨號 CH73-66G4
CHORI-73 雙單倍體斑馬魚 (Danio rerio, Tuebingen line) BAC 庫由 Baoli Zhu 在 Pieter de Jong 位于奧克蘭兒童醫(yī)院研究所 BACPAC Resources 的實驗室構建。文庫的制備遵循我們實驗室開發(fā)的克隆方法(Osoegawa 等,1998)。源 DNA 來自俄勒岡大學神經(jīng)科學研究所的 John H. Postlethwait 博士提供的一條雙單倍體雄性魚。在從冷凍魚獲得的染色質進行瓊脂糖包埋后分離 DNA。提取染色質的過程使用已發(fā)布的緩沖液來分離濃縮的中期染色體(用于流式細胞術和細胞發(fā)生分析)。在使用研杵和研缽在液氮下將冷凍魚研磨成細粉后,該緩沖液用于從單條魚中提取 DNA。高分子量 DNA 用 EcoRI 和 EcoRI 甲基化酶的組合部分消化。將選定大小的 DNA 克隆到 EcoRI 位點之間的 pTARBAC2.1 載體中。將連接產(chǎn)物轉化到 DH10B 電感受態(tài)細胞(T1 噬菌體抗性,Invitrogen)中。該文庫已排列成 390 個 384 孔微量滴定板,并網(wǎng)格化到 8 個22x22cm 尼龍高密度過濾器,用于通過探針雜交進行篩選。每個雜交膜代表超過 18,000 個不同的斑馬魚 BAC 克隆,一式兩份?梢允褂谩皟(nèi)部”Sanger 命名法或“外部”NCBI 推薦命名法在各種公共數(shù)據(jù)庫中找到克隆。例如,CH73-15B7(NCBI 命名法)對應于在微量滴定盤(384 孔型)#15 中發(fā)現(xiàn)的 CHORI-73 BAC 文庫中的一個克隆,位于“15”行和“7”列的交叉處。相同的克隆在“內(nèi)部”Sanger 命名法中標記為:“zH15B7”。 |